生产方法 | 蚕蛹免疫 将蚕蛹用灭活的大肠杆菌K12D31菌株注射,使蚕蛹免疫。穿刺免疫蚕蛹,离心,收集血淋巴细胞。 蚕蛹[大肠杆菌]→免疫蚕蛹[穿刺,离心]→血淋巴细胞收集液 Sephadex G-75柱层析 用醋酸调血淋巴细胞收集液,pH为4,加热到60℃, 保持10-30min, 速冷。20000×g离心,取上清液,用碳酸钠调pH为中性,用Sephadex G-75柱层析。用pH 6.2的磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L)洗脱,用核酸蛋白检测器检测,分别收集杀菌肽(粗品)和溶菌酶。 层析、透析、冷冻干燥 将杀菌肽粗品洗脱液用CM-Sephadex CL-6B 层析,用pH 6.2的磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L)洗脱,洗脱部分再用Phenyl-Sephadex-4B疏水层析,杀菌肽被吸附于柱内,用0.1-0.5 mol/L磷酸盐缓冲液逆梯度洗脱,收集活性部分。透析除盐,冷冻干燥得杀菌肽。 杀菌肽洗脱液[CM-Sephadex CL-6B]→洗脱液[Phenyl-Sephadex-4B]→洗脱液[透析]→透析液[冷冻干燥]→杀菌肽冻干品。 |